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Hoechst 33258 *超級純*使用說明書

發(fā)布時間:2017/11/16      點擊次數(shù):2284

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Hoechst 33258 *超級純*

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Hoechst 33258 *超級純*

A5480L1100

5ml(20μM)

-20

1250

產(chǎn)品描述:

Hoechst 33258是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料,對細胞的毒性較低,在嵌入雙鏈DNA后釋放強烈的藍色熒光。Hoechst 33258為特異性DNA染料,與A-T鍵結合,這種染料對死細胞或經(jīng)70%冷乙醇固定的細胞可立即染色。而活細胞的著色是漸進性的,在10min內(nèi)可達飽和。在熒光顯微鏡下,活細胞核呈彌散均勻熒光,出現(xiàn)細胞凋亡時,細胞核或細胞質(zhì)內(nèi)可見濃染致密的顆粒塊狀熒光。Hoechst 33258常用于細胞凋亡檢測,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測,也可以用于普通的細胞核和線粒體的顯像觀察。

Hoechst經(jīng)常用來代替其它核酸染料如DAPI,這兩種染料關鍵的不同點在于,與DAPI相比,Hoechst 33258具有更強的親脂性,因此能更好的透過完整的細胞膜。用于細胞核染色時,推薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml。

技術參數(shù):

光學性質(zhì):Ex(nm):352      Em(nm):461

化學參數(shù):分子量:533.88   溶劑:Water        CAS:23491-45-4

使用方法:

1.緩沖液制備。用PBS或合適的緩沖液制備10~50µM Hoechst 33258染色液。

2.固定的細胞或組織染色。對于固定的細胞或組織樣品,固定后,適當洗滌去除固定劑。依次按步驟進行免疫熒光染色,和Hoechst33258染色。如果不進行免疫熒光染色,則直接按步驟進行Hoechst33258染色。

a)對于貼壁細胞或組織切片:加入適量Hoechst 33258染色液,覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞:至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液,混勻。室溫放置3-5分鐘。

b)吸除Hoechst 33258染色液,用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,每次3-5分鐘。

c)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長350nm,發(fā)射波長460nm。

3.活細胞或組織染色

a)細胞培養(yǎng)物中加入適量Hoechst 33258染色液,約1/10細胞培養(yǎng)基體積,必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個孔需加入1ml染色液,對于96孔板一個孔需加入100μl染色液。

b)在37℃培養(yǎng)細胞10~20分鐘。

c)用PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。

d)直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長350nm,發(fā)射波長460nm。。

運輸與保存方法:

冰袋(wet ice)運輸。-20℃干燥避光保存,保質(zhì)期12個月。

注意事項

1.  Hoechst 33258溶于水,溶解度可達20μM(約10mg/ml)。您也可直接購買20μM的液體規(guī)格產(chǎn)品(貨號:C5480L1100)。

2.  Hoechst 33258對人體有一定刺激性,請注意適當防護。

3.  熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡量當天完成檢測。

4. 為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

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