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CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針使用說明書

發(fā)布時間:2017/11/16      點擊次數(shù):1857

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CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針

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價格(元)

CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針

4100L1011

25mg

-20

1550

 

熒光標(biāo)記細胞已被廣泛證實可有效確定總細胞的數(shù)量和一個樣本中存在多少活細胞。流式細胞術(shù)結(jié)合熒光染色法是分析非均質(zhì)細胞種群的有力工具。非熒光性的FDA和它的衍生物分子進入細胞后被胞內(nèi)無特異性的酯酶所水解產(chǎn)生熒光。這些熒光產(chǎn)物只能積聚在具有完整細胞膜的細胞中。因此,死細胞無完整細胞膜不能被染色。FDA及其類似物(如CDCFDA)精細的跨膜動力學(xué)以及胞內(nèi)水解特點與細胞功能相關(guān),因此FDA標(biāo)記可以通過熒光顯微鏡或者流式細胞儀來檢測細胞。然而,因為CFSE和它的熒光類似物與GFP或者FITC具有相同的激發(fā)光譜,因此CFSE和它的熒光類似物不能用于GFP轉(zhuǎn)染細胞或者FITC標(biāo)記抗體的應(yīng)用中。VFSE染料與CFSE功能相似,因為它們都包含酯酶切割和胺反應(yīng)的SE基團。VFSE染料能用于多色反應(yīng),因為VFSE與CFSE和它的熒光類似物具有不一樣的激發(fā)和發(fā)射光譜, 因此可以用于GFP轉(zhuǎn)染細胞或者FITC標(biāo)記抗體的應(yīng)用中。

 

常用名

CDCFDA

中文名稱

活細胞熒光示蹤探針

英文名稱

5-(and-6)-Carboxy-2',7'-dichlorofluorescein diacetate, succinimidyl ester

CAS#

/

分子式

C29H19

分子量

626.35

純度

≥95%(HPLC)

Ex(nm)

504

Em(nm)

529

結(jié)構(gòu)式

  

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

運輸與保存方法

常溫運輸,-20℃干燥避光保存,保質(zhì)期24個月。避免反復(fù)多次凍融。

使用方法

1.保存液配制(5mM)

按需配制,如取DMSO 360μL,溶解1mg CDCFDA,超音波溶解,得到5mM 保存液;將其按40μL體積分裝于避光的無菌凍存管中,-20℃可保存2個月。

注意:CDCFDA遇水容易分解,所以在配置時候要用無水DMSO,配置后計算用量盡快使用,多余的立刻避光保存-20℃。DMSO是有機溶劑,對于蛋白質(zhì)會有損傷,所以在配置的時候DMSO用量越少越好;

2. 工作液配制

取5mM的CDCFDA稀釋液1 ul,加入1ml 10%FCS 的PBS稀釋。

3.染色

a.重懸細胞。用有5%FCS的PBS重懸細胞,細胞濃度一般為1x1x106/ml (體外實驗)或1x1x107/ml(轉(zhuǎn)染實驗)。

b.染色。1ml DFSE工作液與1ml細胞懸液混合后37℃孵育5-10分鐘。期間輕輕混勻兩次(用手輕彈管壁,切忌吹打)。

c.終止染色。用*培養(yǎng)液洗滌3次并離心。一般在第2次洗滌后再孵育5分鐘后進行第3次洗滌。冰冷的含10 %新生牛血清RPMI1640(先加入1ml混勻 ,然后續(xù)加入7ml), 輕輕混勻1min(用手輕彈,切忌吹打),1 500 r/ min 離心5 min。

d.流式細胞儀在FL1通道檢測。

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