產(chǎn)品描述

EZ Trans siRNA轉(zhuǎn)染試劑，是一種基于陽(yáng)離子高分子聚合物開發(fā)的新型轉(zhuǎn)染試劑，適用于siRNA 及microRNA (miRNA) 的轉(zhuǎn)染。本產(chǎn)品能在多種常見細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高效率、低毒性的轉(zhuǎn)染效果，且具有操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性佳等優(yōu)點(diǎn)，適用于 siRNA或miRNA 介導(dǎo)的基因抑制實(shí)驗(yàn)。

訂購(gòu)信息

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃保存，有效期 6個(gè)月；-30℃至-10℃保存，有效期12個(gè)月。注：避免反復(fù)凍融。

使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請(qǐng)參考表 1）

1． 接種細(xì)胞

對(duì)于貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，將細(xì)胞按照每孔1-2x10^5個(gè)細(xì)胞的量進(jìn)行鋪板，使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為60%-80% 為佳。

對(duì)于懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前，用PBS清洗細(xì)胞1-2次，用250 μL Opti-MEM I 減血清培養(yǎng)基 (無血清) 重懸細(xì)胞，在24孔板中進(jìn)行細(xì)胞鋪板，細(xì)胞密度為60-80%。

2． 準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑-siRNA復(fù)合物（或轉(zhuǎn)染試劑-miRNA復(fù)合物）

(1)  對(duì)于每孔細(xì)胞，取2 μLsiRNA (20 μM，DEPC水溶解)加入到1.5mL離心管中，加入2 μL轉(zhuǎn)染試劑與siRNA 混合，室溫孵育3 min。

(2)  往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清)，輕輕混勻，在室溫下靜置30 min，形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。

(3)  30 min后，往上述復(fù)合物中加入250 μLOpti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清)，輕輕混勻。

3． 轉(zhuǎn)染細(xì)胞

(1) 細(xì)胞用 PBS 清洗 1-2 次，將上述 350µL 轉(zhuǎn)染試劑-siRNA 復(fù)合物加入每孔細(xì)胞?？稍谵D(zhuǎn)染 6h 后換液或者補(bǔ)充 150μL 培養(yǎng)基 (含血清)，總體積達(dá)到 500μL，即達(dá)到常規(guī)的培養(yǎng)皿使用培養(yǎng)液的量。

(2) 在 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24-48 h，之后即可檢測(cè)基因干擾效果或者后續(xù)功能實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

1、本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2、小 RNA(siRNA/miRNA)質(zhì)量：請(qǐng)務(wù)必使用高純度無內(nèi)毒素轉(zhuǎn)染級(jí) RNA。

3、整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程使用無 RNA 酶和無熱原性的材料，如離心管、槍頭、緩沖液。

4、細(xì)胞條件：細(xì)胞狀態(tài)會(huì)極大影響轉(zhuǎn)染效率，待轉(zhuǎn)染細(xì)胞應(yīng)處于良好生長(zhǎng)狀態(tài)，建議使用生長(zhǎng)處于指數(shù)期、存活率大于 90% 的細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。

5、siRNA 與轉(zhuǎn)染試劑使用比例：對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系，轉(zhuǎn)染復(fù)合物中siRNA (20 μM Stock)與轉(zhuǎn)染試劑的比例在1:1 至1:3 之間，推薦比例為1:2。想要獲得優(yōu)的基因干擾結(jié)果，需要對(duì)這一比例進(jìn)行優(yōu)化。

6、由于某些特殊培養(yǎng)基中的成分可能會(huì)抑制陽(yáng)離子聚合物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，因此建議測(cè)試這些培養(yǎng)基與本產(chǎn)品的相容性，以確保最佳轉(zhuǎn)染效果。

7、細(xì)胞類型、基因特性、siRNA/miRNA 的效力、靶 mRNA 的半衰期和靶蛋白的周轉(zhuǎn)率等因素都會(huì)影響siRNA/miRNA 介導(dǎo)的基因敲低效果。

8、建議 siRNA/miRNA 工作濃度在 10-100nM 之間，轉(zhuǎn)染試劑的體積應(yīng)根據(jù) siRNA/miRNA 濃度和培養(yǎng)皿的大小進(jìn)行調(diào)整，請(qǐng)參見表 1。

表 1：不同培養(yǎng)體積對(duì)應(yīng)的待轉(zhuǎn)siRNA/miRNA、 EZ Trans、稀釋液用量

注：該表使用量?jī)H供參考，具體使用量還需根據(jù)細(xì)胞類型及其他實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。a: 稀釋轉(zhuǎn)染試劑-RNA復(fù)合物所需培養(yǎng)基的量；b: 加入轉(zhuǎn)染試劑-RNA復(fù)合物的培養(yǎng)基的量。

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