溶酶體染色試劑盒的重要理論
更新時間:2018-08-09 點擊次數(shù):1373
溶酶體染色試劑盒通常勻化次數(shù)為20至40下(或細胞顆粒群/組織塊狀消失為止)達到80%的細胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細胞裂解程度,完整細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán),低于50%可以增加勻化次數(shù)。通常孵育5分鐘(不宜超過5分鐘)達到80%的細胞裂解為理想狀態(tài),但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的細胞裂解程度,完整細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加孵育時間和渦旋震蕩次數(shù)。
溶酶體染色試劑盒可將胞內廢物、脂質、碳水化合物、蛋白質及其他大分子等物質分解為小分子化合物。正常的溶酶體功能使細胞能有效的動員和循環(huán)利用細胞組分,但也能阻止受損細胞器、錯誤折疊蛋白質及入侵病原物的積累。雖然溶酶體存在于所有動物細胞中,但在抗病細胞如淋巴細胞中豐度高。溶酶體含有約50種不同的降解酶,所有水解酶在pH5左右活性,但其周圍胞質中pH為7.2。溶酶體膜內含有一種特殊的轉運蛋白,可以利用ATP水解的能量將胞質中的H+泵入溶酶體,以維持其pH5。這些酶協(xié)同作用,以維持蛋白和細胞器的穩(wěn)態(tài)。若溶酶體內的這些酶發(fā)生異常則會導致多種疾病的產生,這些酶如組織蛋白酶D的表達水平顯著降低。上調表達溶酶體基因的水平,正探索作為治療神經(jīng)退行性疾病如帕金森癥的一種潛在的治療途徑。
統(tǒng)計學分析所得計量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準差(X±S)表示采用SPSS17.0進行統(tǒng)計分析,兩樣本均數(shù)的比較采用獨立樣本t檢驗,p<0.05為具有統(tǒng)計學差異。每組實驗結果重復3次。結果2.1 Lysotracker Red染色觀察CREG對小鼠腹腔巨噬細胞溶酶體發(fā)生數(shù)量的影響不同實驗組小鼠腹腔巨噬細胞Lysotracker Red染色結果顯示,與C57小鼠相比,CREG+/-雜合子小鼠腹腔巨噬細胞中l(wèi)ysotracker紅色熒光強度明顯減少。而與CREG+/-雜合子小鼠相比,微量滲透泵以30μg/kg/d皮下給予重組CREG蛋白的CREG+/-雜合子小鼠腹腔巨噬細胞lysotracker紅色熒光強度明顯增加。