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Alexa Fluor 488 標記鬼筆環(huán)肽(綠色)使用說明書

發(fā)布時間:2017/11/17      點擊次數(shù):7261

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Alexa Fluor 488-Phalloidin, Alexa Fluor488 標記鬼筆環(huán)肽

產(chǎn)品名稱

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Alexa Fluor 488 標記鬼筆環(huán)肽(綠色)

C6242L0520

300 T

-20℃

1950

 

產(chǎn)品描述

鬼筆環(huán)肽是從一種菌類Amanita Dhalloides所提取出來的環(huán)肽。它與F-actin競爭性的結(jié)合。熒光標記的鬼筆環(huán)肽在納克水平就可與F-actin選擇性的結(jié)合并且易溶于水,為檢測組織切片,培養(yǎng)細胞和無細胞體系中的actin的定位和定量提供了非常方便的標記方法。

本品為Alexa Fluor488標記的鬼筆環(huán)肽,可發(fā)出高亮度、穩(wěn)定的綠色熒光,染色反應特異性強,對比性高,適合用作F-actin的定性和定量檢測。與Actin抗體比較,Alexa Fluor488 鬼筆環(huán)肽具有如下優(yōu)點:1)與actin亞單位一比一結(jié)合,并且不與G-actin結(jié)合,具有比Actin抗體更好的染色效果;2)且本品的結(jié)合沒有物種差異性,適用性廣泛;3)鬼筆環(huán)肽標記的非特異性信號可忽略,因而圖像的反差較好;4)染色與用于細胞分析的其他熒光染色*兼容,包括熒光蛋白、Qdot® 納米晶體和其他Alexa Fluor偶聯(lián)物(包含Alexa Fluor偶聯(lián)二抗);5)經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學特性。

技術資料

1. Ex(nm):493

2. Em(nm):517

3. 分子量:1900

4. 溶劑:DMSO

5. 結(jié)構(gòu)式:

 

運輸與保存方法

冰袋運輸。收到貨后-20℃避光干燥保存,1年有效。

使用方法:

1.   準備1000x DMSO Alexa FluorTM 488標記鬼筆環(huán)肽存儲液

用30µL DMSO 溶解粉末狀Alexa FluorTM 488標記鬼筆環(huán)肽,可按需分裝并于-20℃避光干燥保存,分裝保存,避免反復凍融。

2.   準備1x Alexa Fluor 488標記鬼筆環(huán)肽工作液

吸取1µL 1000×Alexa Fluor 488標記鬼筆環(huán)肽存儲液到1ml 含有1%BSA的PBS緩沖液中即可得到1×工作液。

注意:不同的細胞染色狀況不同,相應Alexa Fluor 488鬼筆環(huán)肽使用量也需根據(jù)不同情況而定。

3. 細胞染色步驟

1)細胞培養(yǎng)過夜或更長,使其密度達到50-60%匯合度。

2)吸掉培養(yǎng)液,37℃預熱的1×PBS(pH 7.4)清洗細胞2次。

3)使用含有3-4%甲醛的PBS溶液進行細胞固定,室溫固定10-30min。

注意:避免固定劑中含有甲醇成分,因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。

4)室溫條件下,用PBS清洗固定好的細胞2~3次,每次10min。

5)(可選):室溫條件下,用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化處理3-5min,從而增加其通透性。

注意:鬼筆環(huán)肽的分子量小,很容易通過細胞,一般情況下不需對細胞進行冷丙酮和TRITON X-100處理。

6)室溫條件下,用PBS清洗細胞2~3次,每次10min。

7)每孔加入 Alexa Fluor 488標記鬼筆環(huán)肽工作液100µl/孔(96孔板),室溫避光染色20-90min,夏季時間相對短些。

8)用PBS清洗細胞3次,每次5min,去除掉多余的Alexa Fluor 488標記鬼筆環(huán)肽。

9)(可選):加入足量的即用型DAPI溶液對細胞核進行復染,如:100µl/孔(96孔板),室溫3~5min。用PBS清洗細胞2次,每次5min。

10)于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進行熒光觀察,選擇Alexa FluorTM 488激發(fā)/發(fā)射濾片(Ex/Em=493/517nm)和/或DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片(Ex/Em=364/454nm)。

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