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Smart Cell 線粒體染色試劑盒Orange使用說明書

發(fā)布時間:2017/11/15      點擊次數(shù):1735

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SmartCell 線粒體染色試劑盒Orange(同Mitotracker Orang)

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SmartCell 線粒體染色試劑盒Orange(同Mitotracker Orange)

C6244L0553

500 assays

-20℃

2450

 

產(chǎn)品描述

線粒體(mitochondrion)是一種存在于大多數(shù)真核細胞中兩層膜結(jié)構(gòu)的細胞器,是細胞中的“能量工廠”(cellular power plants)",生產(chǎn)了細胞所需的大部分ATP,除了為細胞提供能量外,還涉及諸如細胞分化、細胞信息傳遞和細胞凋亡等過程,并擁有調(diào)控細胞生長細胞周期的能力。已有文獻報道,線粒體還與線粒體失調(diào)癥、心臟功能障礙、衰老等人類疾病有關(guān)。盡管大部分細胞遺傳物質(zhì)DNA在細胞核內(nèi),但線粒體擁有獨立的基因組,呈現(xiàn)母性遺傳?;谝陨咸攸c,線粒體是生物、生命科技領(lǐng)域的研究熱點。

Smart Cell染色試劑盒Life-iLab公司專門研發(fā)的一類熒光成像工具,試劑盒設計嚴謹,人為手動操作的步驟很少。用來標記細胞器、亞細胞等結(jié)構(gòu),例如細胞膜、線粒體、線粒體和細胞核等。

Smart Cell線粒體染色試劑盒可以標記活細胞中的線粒體,使之帶橙色熒光(Ex/Em =545/575 nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復合物,線粒選擇性染料,該染料能輕易進入活細胞內(nèi),通過線粒體膜電位變化滲透進入線粒體,并在線粒體中富集。Smart Cell線粒體染色試劑盒提供了標記線粒體的全套試劑,能提供藍色/綠色/紅色/橙色等不同熒光供選擇,既可單獨使用,也支持對細胞的多重熒光分析。這種的細胞標簽為從空間上和時間上研究發(fā)生的細胞活動提供了一種十分有效的方法。

試劑盒組分

組分

數(shù)量

Component A: MitoView Orange染料 

100 µL (500 X DMSO stock solution)

Component B: 活細胞染色緩沖液 

50 mL

使用方法 

 1. 準備線粒體染色液

1.1 室溫避光放置5-10分鐘,預熱MitoView Orange染料(Component A) 

1.2 20µL預熱好的MitoView Orange染料(Component A),10 mL活細胞染色緩沖液(Component B)進行稀釋。 

注意:1) 20μL MitoView Orange染料(Component A)足夠完成1塊96孔板實驗剩余的MitoView Orange染料(Component A) 可以根據(jù)需要分裝避光保存于-20℃,避免反復凍融。2)*染料濃度根據(jù)具體應用會有不同,染色條件根據(jù)細胞類型、細胞或組織的染料滲透性不同可以進行調(diào)整優(yōu)化。

2. 細胞染色 

2.1 貼壁細胞:在96孔板(100μL)或培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)細胞,當細胞達到70-80%融合度,在96孔板或培養(yǎng)皿內(nèi)添加等體積的染色工作液(步驟1.2),在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細胞30分鐘-2小時。用HHBS [含20mM Hepes的Hanks緩沖液]或用自配Buffer(Hanks Buffer 與生長培養(yǎng)基按1:1)替換色染液。同TRITC設置在顯微鏡下進行熒光觀察。

注意:如果細胞沒有充分染色,可以適當增加染料濃度或增加染色時間進行改善

2.2 懸浮細胞1000 rpm 條件下離心細胞培養(yǎng)液5分鐘,棄去上清,用預熱好的細胞培養(yǎng)液溫和的重懸細胞,然后添加等體積的染色工作液(步驟1.2),在37°C, 5% CO2條件下培養(yǎng)細胞30分鐘-2小時。用HHBS [含20mM Hepes的Hanks緩沖液]或用自配Buffer(Hanks Buffer 與生長培養(yǎng)基按1:1)替換色染液。同TRITC設置在顯微鏡下進行熒光觀察。

 

圖1:HeLa 細胞用SmartCell線粒體染色試劑盒Orange染色后進行成像分析

(所用96孔板為Costar black)

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