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D-Luciferin, Potassium Salt D-熒光素鉀鹽*（超純）

產(chǎn)品描述

D-Luciferin Free acid, potassium salt, and sodium salt *UltraPure Grade*D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整個生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是體內(nèi)活體成像技術(shù)。其作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，熒光素（底物）能夠被氧化發(fā)光。當熒光素過量時，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細胞后，導入研究動物如大小鼠體內(nèi)，之后注入熒光素，通過生物發(fā)光成像技術(shù)（BLI）來檢測光強度變化，從而實時監(jiān)測疾病發(fā)展狀態(tài)或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應體系的影響，根據(jù)生物發(fā)光強度的變化來指示能量或生命體征。

D-熒光素也常用于體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析；高通量測序和各種污染檢測。目前市場上有三種產(chǎn)品形式，D-熒光素（游離酸），D-熒光素鈉鹽，以及D-熒光素鉀鹽。這三種產(chǎn)品主要的差別在于溶解特性上。D-熒光素（游離酸）水溶性以及緩沖體系的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。但鈉鹽和鉀鹽形式的D-熒光素能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內(nèi)實驗。配成液體后的這三種產(chǎn)品，在絕大多數(shù)的應用上都沒有實質(zhì)性的差別。

產(chǎn)品性質(zhì)

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20℃保存，保質(zhì)期12個月。

使用方法

1．體外生物發(fā)光檢測

1）用蒸餾水溶解D-熒光素鉀鹽，配制成100 mM的儲存液（200×，濃度30mg/ml）?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b于-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融。

2）用預熱好的組織培養(yǎng)基1:200稀釋儲存液，配制工作液（終濃度150µg/ml）。

3）去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基直至無殘留。

4）待圖像分析前，向細胞內(nèi)添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析（或者細胞放在37℃短時間孵育后檢測可增強信號）。

2．    活體成像分析

1）用無菌的DPBS（w/o Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽工作液（15mg/ml），0.2µm濾膜過濾除菌。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融。一旦使用，放到4℃解凍，保持冰冷且避光。

 2） 注射量取決于注射方式，具體如下：

3） 注射入體內(nèi)10-20 min（待光信號達到zui強穩(wěn)定平臺期），再進行成像分析。

注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學曲線，從而確定zui高信號檢測時間和信號平臺期。

 注意事項

1) 本品（firefly luciferin）和甲蟲熒光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl) -2-thiazoline-4-carboxylic acid，僅僅是不同公司在命名上的差異。

2) 本品保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲存液過濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復凍融。如果有條件，對儲存液充氮氣或氬氣（防止氧化），穩(wěn)定性和保存時間更長，長達1年。

3) 注射方式，動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學曲線，確定*信號平臺期和*的檢測時間。

4) 熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應用上沒有差別，兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻來看，鉀鹽的使用率遠高于鈉鹽，尤其是體內(nèi)實驗。兩者功效相同。

5) 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

1、 熒光素可以用于動物活體嗎？

答：我們許多客戶用熒光素作用于動物活體，目前世界上合成熒光素主要有兩大生產(chǎn)商，因此目前您使用的就是這兩種生產(chǎn)商其中之一生產(chǎn)的。請注意：Promega出售的熒光素是Beetle Luciferin，而我們公司出售的是Firefly Luciferin，但這兩種的結(jié)構(gòu)是相同的（結(jié)構(gòu)式如下）。

2、 怎么溶解熒光素？溶解后怎樣使它穩(wěn)定？

答：許多客戶已經(jīng)告訴我們熒光素溶于水中，然后分裝好保存于-80℃，不會有重大的影響。然而，關(guān)于溶解后熒光素的穩(wěn)定性也有相矛盾的報道。對于大多敏感的實驗，為了減少一些實驗中的可變因素我們強烈建議您現(xiàn)配現(xiàn)用（比如低濃度的酶或者不合適的反應溫度或不合適的鹽濃度等等可能需要高濃度的底物來驅(qū)使反應的完成。）